Dados do Trabalho

Título

TRANSFECÇAO CELULAR DE ANTI-MIR-21 APLICADA EM LINHAGEM DE CARCINOMA RENAL DE CELULAS CLARAS METASTATICAS

Introdução e Objetivo

O carcinoma renal de células claras é o subtipo histológico mais frequente dos carcinomas de células renais, sendo tratado principalmente por cirurgia em estágio inicial, e farmacologicamente em estágio metastático. Nas últimas décadas alguns estudos vêm ressaltando o papel dos miRNAs, enfatizando o onco miR-21, o qual foi relacionado com o início e progressão do carcinoma renal de células claras metastáticas. Dessa forma, realizamos uma transfecção em linhagem metastática (Caki-1) para tentarmos avaliar o efeito biológico associado a diminuição da expressão do miR-21. 

Método

As células foram transfectadas com aproximadamente 50 nM de anti-miR-21, assim como o controle negativo precursor de mRNAs (Ambion, Austion, TX, USA). Os pré-microRNAs e seus controles foram diluídos em 50µL de meio OPTI-MEM I em diferentes tubos em uma concentração final de 10 µM (2 µL da solução de 10 µM). A seguir, 3µL dos agentes de transfecção Lipofectamina RNAiMax (INVITROGEN, Calrsbad, CA, USA) foram diluídos em 50µL de meio OPTI-MEM I. A confirmação de eficiência de transfecção foi realizada por qPCR. 

Resultados

Em nossos resultados preliminares encontramos uma diminuição estatisticamente significante (p=0.0171) da expressão de miR-21 nas células transfectadas com anti-miR-21 em comparação com o Scramble. Além disso, encontramos diminuição da expressão de anti-miR-21 (p<0.0008) em comparação ao controle, o qual não foi submetido à transfecção.

Conclusão

Concluímos que o estabelecimento da transfecção de anti-miR-21 é possível utilizando essa metodologia e agora poderemos avaliar o efeito acarretado nesta linhagem após a diminuição dessa expressão.