Dados do Trabalho

Título

ANALISE IN VITRO DO BLOQUEIO DO MIR221/222 NO CARCINOMA RENAL DE CELULAS CLARAS METASTATICO

Introdução e Objetivo

O Carcinoma renal de células claras (CRCC) é o subtipo histológico mais comum, compreendido entre o grupo de carcinoma de células renais, sendo responsável por 75% dos carcinomas renais. O CRCC é associado a síndrome autossômica dominante de Von Hippel Lindau, onde ocorre a inativação do gene supressor tumoral de VHL. Nos últimos anos, descobriu-se que grupos de microRNAs (miRNA), pequenos RNAs não codificantes que regulam a expressão gênica a nível pós-transcricional, possuem expressão aberrante em tecidos neoplásicos. No CRCC, os miRNAs 221 e 222 são superexpressos e são codificados juntos. Essa superexpressão ectópica, resulta na redução do gene p27 (Kip-1), inibidor de quinases dependentes de ciclina, com papel crucial na regulação do ciclo celular. Dessa forma, nosso estudo em questão avaliou o efeito da inibição destes microRNAs em linhagem celular metastática do CRCC.

Método

Utilizamos a linhagem celular Caki-1, na qual foram transfectadas com anti-miR 221 e 222, a fim de inibir a sua expressão. Após a transfecção foi realizado a extração de miRNA das células, feito a transcrição reversa, na qual é sintetizado uma fita de DNA complementar (cDNA) para a avaliação da eficácia da expressão da transfecção por RT-qPCR.

Resultados

Em nossos resultados, vimos que após análise da expressão por RT-qPCR e análise estatística, os níveis de expressão do miR 221 (p=0.0432) e do miR 222 (p<0.0001) diminuíram de forma estatisticamente significativa, ambos em comparação com o seu respectivo grupo controle negativo scramble, na qual constitui-se em uma maquinaria inespecífica para os miRNAs utilizados.

Conclusão

Demonstramos a eficácia do bloqueio da expressão do miR221/222 através de seus inibidores. Assim, tendo em vista que sua superexpressão é um dos fatores que pode contribuir para a carcinogênese associada ao desenvolvimento do CRCC, através de sua inibição podemos avaliar o efeito biológico desta perda de expressão em uma linhagem celular de carcinoma renal de células claras.